非洲豬瘟（ASF）是生豬養(yǎng)殖業(yè)的頭號(hào)威脅，其強(qiáng)傳染性與高死亡率可造成巨大經(jīng)濟(jì)損失?？焖?、準(zhǔn)確的早期檢測(cè)是防控疫情的關(guān)鍵。非洲豬瘟快檢儀作為核心工具，已廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)及檢驗(yàn)檢疫環(huán)節(jié)。掌握其規(guī)范操作方法，不僅能提升檢測(cè)效率，更能為疫情預(yù)警和精準(zhǔn)處置提供可靠依據(jù)。
 

　　一、檢測(cè)前的周密準(zhǔn)備

　　1.樣本采集與處理

　　樣本質(zhì)量直接決定檢測(cè)結(jié)果的可靠性。常見(jiàn)樣本類型包括：

　　①血液樣本：采集豬只靜脈血后，靜置析出血清或使用抗凝血漿。需離心去除雜質(zhì)，收集上清液。

　　②組織樣本：取少量組織勻漿后，用PBS緩沖液稀釋，離心取上清。

　?、劭诒?環(huán)境拭子：將棉簽深入豬只鼻腔或口腔旋轉(zhuǎn)取樣，浸入緩沖液混合后使用。

　　所有樣本需避免反復(fù)凍融，若含防腐劑NaN3需注意其可能影響酶反應(yīng)。

　　2.儀器與試劑準(zhǔn)備

　　①儀器校準(zhǔn)：開機(jī)前確保設(shè)備放置于水平臺(tái)面，通風(fēng)口無(wú)遮擋，環(huán)境溫度保持在15–35℃。部分儀器需預(yù)熱以避免溫差干擾。

　　②試劑配制：根據(jù)檢測(cè)需求選擇配套試劑盒。試劑需平衡至室溫，濃縮洗滌液按比例稀釋。

　　實(shí)驗(yàn)需備齊微量加樣器、離心管、封板膜等耗材，避免交叉污染。

　　二、規(guī)范操作流程與關(guān)鍵步驟

　　不同原理的快檢儀操作側(cè)重不同，但均需嚴(yán)格遵循流程：

　　1.熒光PCR快檢儀

　　①加樣與程序設(shè)置：將處理好的樣本與反應(yīng)液加入PCR管，放置于儀器樣品艙。在觸摸屏上選擇預(yù)設(shè)程序，設(shè)置溫度與時(shí)間參數(shù)。

　　②運(yùn)行與監(jiān)控：?jiǎn)?dòng)后，儀器自動(dòng)進(jìn)行核酸擴(kuò)增及熒光信號(hào)采集。操作員需實(shí)時(shí)觀察擴(kuò)增曲線，確保反應(yīng)正常。

　　③結(jié)果判讀：檢測(cè)完成后，軟件自動(dòng)生成Ct值。Ct值越低，表明病毒載量越高。結(jié)果需與陰/陽(yáng)性對(duì)照對(duì)比驗(yàn)證。

　　2.ELISA免疫檢測(cè)儀（快速篩查）

　?、侔鍡l加樣：從試劑盒中取出預(yù)包被板條，依次加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和待測(cè)樣本，并加入酶標(biāo)記物。

　?、跍赜c洗滌：37℃避光溫育60分鐘后，用洗滌液清洗板孔5次，去除未結(jié)合物質(zhì)。

　?、埏@色與測(cè)定：加入底物液避光反應(yīng)15分鐘，再加入終止液。15分鐘內(nèi)將板條放入儀器，在450nm波長(zhǎng)下讀取OD值，分析樣本陰陽(yáng)性。

　　三、注意事項(xiàng)與維護(hù)要點(diǎn)

　　1.避免污染：實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)分區(qū)，操作中勤換手套，耗材一次性使用。

　　2.質(zhì)量控制：每批次檢測(cè)均需設(shè)置陰/陽(yáng)性對(duì)照，確保試劑有效性及操作準(zhǔn)確性。

　　3.儀器維護(hù)：定期清潔樣品艙，檢查光學(xué)系統(tǒng)與加熱模塊。長(zhǎng)期不用時(shí)斷電存放于干燥環(huán)境。

　　4.數(shù)據(jù)管理：結(jié)果導(dǎo)出保存?zhèn)浞?，便于溯源與分析。部分儀器支持USB導(dǎo)出或直接打印報(bào)告。

　　結(jié)語(yǔ)

　　非洲豬瘟快檢儀是疫情防線上的“偵察兵”，其規(guī)范使用貫穿于樣本處理、精確操作及系統(tǒng)維護(hù)的全過(guò)程。無(wú)論是實(shí)驗(yàn)室的熒光PCR儀，還是現(xiàn)場(chǎng)便捷的ELISA檢測(cè)儀，只有嚴(yán)格遵循流程，才能確保結(jié)果可靠，真正實(shí)現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)、早處置，為生豬產(chǎn)業(yè)筑牢安全屏障。